Q875246 Q-琼脂糖凝胶FF, 分析级

附录一：

附录二：介质压力流速曲线

附录三：操作说明

1 、装柱

（1）让所有的材料和试剂达到室温。配制初始缓冲液（平衡液）和洗脱缓冲液。

（2）根据柱子大小取所需量的凝胶，清洗掉20%乙醇，抽干，用初始缓冲液（按凝胶：缓冲液=3：1的比例）配成匀浆。

（3）将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位（液面略高于滤膜），务必使底端无气泡。

（4）用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。

（5）打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过，使柱床稳定。用2~3倍柱体积的缓冲液平衡柱子。

2 、平衡

让平衡缓冲液以一定流速流过柱子，到流出液电导和pH不变。平衡液是低浓度的缓冲溶液，如Tris、PBS等。

3 、上样

（1）样品用平衡液配制，浑浊的样品要离心和过滤后上样。盐浓度太大的样品处理后再配。

（2）一般情况是让目标产品结合在柱子上，用平衡液洗去杂质，再选择一种洗脱液洗下目标产品。

（3）介质对样品组分吸附的程度取决于样品的带电性质、流动相的离子强度和pH值。盐浓度小，介质对样品组分吸附较牢。用DEAE介质时，推荐的pH值是小于目标产品等电点1个单位。

4 、洗脱

Q琼脂糖凝胶FF介质可用增大盐浓度或减小pH值进行洗脱，常用增大盐浓度的办法洗脱。

5、再生

一般用高盐浓度的缓冲液（含1~2mol/L NaCl）洗或减小pH洗10倍以上柱体积，接着用结合蛋白的平衡液洗到平衡，可再次使用。

若有失活蛋白质或脂类物质在再生时洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。

6 、在位清洗

（1）对于以离子键结合上去的蛋白，可以用2M NaCl去除。

（2）对沉淀蛋白、对以疏水性结合的蛋白或脂类，可用1M NaOH 去除。

（3）对强疏水性结合的蛋白、脂类等，用4~10倍柱体积的70%乙醇或30%异丙醇清洗，但要注意有机溶剂的浓度以梯度的方式逐渐增加，否则容易产生气泡。

清洗完毕后，用至少3倍缓冲液平衡柱子。

7 、注意

在装柱、使用和保存柱子的时候，要避免柱子流干，气泡进入。

在使用过程中，不能使用强酸，如使用酸洗，应使用浓度低于0.1 M的冰醋酸。

8 、去热源

用0.5M的氢氧化钠清洗柱子5~6小时或用0.1M的氢氧化钠24小时。或用以下方法步骤去除：

（1）2倍柱体积的70%乙醇；

（2）2倍柱体积50mM Tris-HCl pH7.5；

（3）1倍柱体积4M尿素；

（4）3倍柱体积的Tris缓冲液+0.1M NaCl；

以上缓冲液都在无热源的双蒸水中配制。

9、 消毒

用0.5~1M NaOH室温下洗8~10倍柱体积，初始缓冲液平衡柱子。

10 、灭菌

置介质于高压灭菌锅中120℃下30分钟。

11、注意事项

产品应密封贮存在4℃~25℃（保存溶液为20% 乙醇），通风、干燥、清洁的地方。不能冷冻。

用过的柱子贮存在4℃（20% 乙醇）。

避免与氧化剂接触；避免在pH< 4的环境中长时间暴露(一周,20℃)。